熒光分子探針具有結(jié)構(gòu)可變，合成簡單和易于修飾等特點，被廣泛應(yīng)用于核酸、酶、蛋白質(zhì)及細(xì)胞等生物分析物的檢測中，是分子診斷中不可或缺的研究工具。隨著PCR檢測技術(shù)的發(fā)展，對熒光探針的靈敏度、熒光強(qiáng)度、背景信號等指標(biāo)要求也越來越高。當(dāng)qPCR探針長，信噪比差時，該怎么辦呢？

隨著探針長度的增加，單淬滅探針的淬滅效果減弱，雙淬滅探針的出現(xiàn)很好的解決了這個問題。常規(guī)探針在 5' 端有一個熒光基團(tuán)，在 3' 端有一個淬滅基團(tuán)。泓迅科技雙淬滅探針在常規(guī)探針內(nèi)部增加一個淬滅基團(tuán)，減少熒光“泄露”現(xiàn)象，在實驗中可獲得更低的熒光背景信號，提高檢測的靈敏度。

泓迅科技雙淬滅探針與淬滅基團(tuán)選擇列表

通常情況下，SYNO Q1 用于在480-580nm范圍內(nèi)的淬滅，可與常用熒光基團(tuán)配合使用，如FAM、VIC和HEX等；SYNO Q2 用于在550-650nm范圍內(nèi)的淬滅，如ROX、TXR、TAMRA、CY5和ATTO 647等熒光基團(tuán)最為有效。

高質(zhì)量的熒光探針可顯著提高試驗效率和檢測準(zhǔn)確性。熒光探針的評價標(biāo)準(zhǔn)主要包括：選擇性、靈敏度、響應(yīng)速度、熒光增強(qiáng)倍數(shù)、穩(wěn)定性和生物相容性等。常規(guī)核酸探針只有一種效應(yīng)淬滅熒光！淬滅基團(tuán)對熒光基團(tuán)的淬滅能力是有距離限制的，當(dāng)淬滅基團(tuán)與熒光基團(tuán)距離較近時，淬滅效果好，當(dāng)淬滅基團(tuán)與熒光探針距離較遠(yuǎn)時，淬滅效果差，背景熒光信號會增強(qiáng)。雙淬滅探針可有效解決“距離”問題，讓qPCR試驗如虎添翼！

常規(guī)探針與雙淬滅探針對比

雙淬滅TaqMan探針應(yīng)用于新型冠狀病毒核酸檢測的初步研究

伍嘉豪, 張嫦麗, 王嫻默, 范文, 易華偉

在核酸檢測中，由于采樣和qPCR靈敏度問題，假陰性結(jié)果經(jīng)常發(fā)生。為了提升對SARS-CoV-2核酸的檢測效果，研究人員開發(fā)了一種雙淬滅TaqMan探針，其含有兩個淬滅基團(tuán)。與單淬滅TaqMan探針相比，雙淬滅TaqMan探針的背景熒光信號更低（161±9 vs 290±18）。此外，研究表明，雙淬滅TaqMan探針檢測系統(tǒng)具有更好的檢測精度（CV 1.4% vs 2.3%; 0.6% vs 2.1%）和更低的檢測下限。

單淬滅和雙淬滅 TaqMan 探針示意圖及探針的熒光信號檢測

雙淬滅熒光探針在腸癌患者腸道菌群qPCR檢測中的應(yīng)用

臧彩霞,奚曉華,朱會芳等

研究者探討了雙淬滅熒光探針在腸癌患者腸道菌群熒光定量（qPCR）檢測中的應(yīng)用效果。通過接受手術(shù)的42例腸癌患者研究組與健康體檢成人38例對照組，收集標(biāo)本，用常規(guī) qPCR和雙淬熒光探針qPCR檢測腸道菌群的表達(dá)量。結(jié)果研究組的膽汁酸、血清總膽汁酸、次級膽汁酸均高于對照組（P＜0.05）。研究表明，雙淬滅熒光探針檢測腸道菌群、 膽汁酸的方法便捷，結(jié)果準(zhǔn)確，對鑒別及篩查早期腸癌患者有指導(dǎo)意義，值得臨床推廣。

參考文獻(xiàn)

[1] Marras SA, Kramer FR, Tyagi S. Efficiencies of fluorescence resonance energy transfer and contact-mediated quenching in oligonucleotide probes. Nucleic Acids Res. 2002 Nov 1;30(21):e122.

[2] 伍嘉豪, 張嫦麗, 王嫻默, 范文, 易華偉. 雙淬滅TaqMan探針應(yīng)用于新型冠狀病毒核酸檢測的初步研究[J]. 病毒學(xué)報, 2022, 38 (04): 784-790.

[3] 臧彩霞,奚曉華,朱會芳等.雙淬滅熒光探針在腸癌患者腸道菌群qPCR檢測中的應(yīng)用[J].臨床醫(yī)學(xué)工程,2023,30(09):1199-1200.

[4] 張園,張海霞.核酸探針及其在生物分析中的應(yīng)用[J].分析試驗室,2020,39(09):1002-1012.